- ОТ-ПЦР
-
В молекулярной биологии reverse transcription polymerase chain reaction сокращают как RT-PCR; ПЦР с применением обратной транскрипции, соответственно, как ОТ-ПЦР. Это метод амплификации специфического фрагмента рибонуклеиновой кислоты (РНК).
Одноцепочечную молекулу РНК превращают в реакции обратной транскрипции (ОТ, RT, reverse transcription) в комплементарную ДНК (cDNA) и далее амплифицируют уже одноцепочечную молекулу ДНК, используя традиционную ПЦР. RT-PCR (ОТ-ПЦР) не следует путать с Real-time ПЦР (Q-PCR), которую также иногда неверно сокращают как RT-PCR.
Описание метода
Для превращения последовательности РНК в комплементарную ДНК используют обратную транскриптазу:
- 1. Реакция первой цепочки:
- 2. Реакция второй цепочки:
- После того как обратная транскрипция закончена и образована cDNA на матрице мРНК, следующие циклы производятся по стандартной методике ПЦР.
После около 30 циклов амплификации образуются миллионы копий нужной последовательности.
Использование ОТ-ПЦР
RT-PCR обычно используется при изучении ВИЧ, так как ВИЧ является ретровирусом и поэтому использует фермент обратную транскриптазу ВИЧ (HIV-Reverse Transcriptase) для синтеза вирусной ДНК, которая затем встраивается в геном хозяина.
Экспоненциальная амплификация при помощи ОТ-ПЦР является чувствительной методикой, с помощью которой может быть обнаружено малое количество молекул РНК. ОТ-ПЦР широко используется для диагностики генетических заболеваний и полуколичественного определения специфических молекул РНК в клетке или ткани как индикатор экспрессии соответствующих генов.
См. также
Wikimedia Foundation. 2010.